AFT總量(Aflatoxin Total)ELISA檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱：AFT總量ELISA檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述：AFT是一類真菌（如黃曲霉和寄生曲霉）的有毒的代謝產(chǎn)物，它們具有很強(qiáng)的致癌性，主要存在于谷物，堅(jiān)果，棉籽以及一些和人類血液，動(dòng)物飼料相關(guān)的產(chǎn)品中。農(nóng)作物被收獲后有可能被下列的一種或幾種AFT污染：B1、B2、G1、G2。1993年AFT被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為I類致癌物，是一種毒性*的劇毒物質(zhì)。它被證明對(duì)人和動(dòng)物的肝臟、腎臟等組織和器官具有很大的危害。產(chǎn)生AFT的霉菌（如黃曲霉、寄生曲霉等）遍及世界各地，AFT的污染可以發(fā)生在植物的生長(zhǎng)、收獲和加工、貯藏、運(yùn)輸?shù)冗^程中。及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染源是的預(yù)防AFT污染的方法。

  AFT總量ELISA檢測(cè)試劑盒本產(chǎn)品是利用免疫直接競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)原理建立的一種定量檢測(cè)試劑盒。具有簡(jiǎn)單、快速，無(wú)需特殊儀器設(shè)備等優(yōu)勢(shì)，既可以在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，也可在農(nóng)場(chǎng)、飼料混合車間等進(jìn)行實(shí)地測(cè)定。本試劑盒結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度度為0.1ppb，準(zhǔn)確率大于95% 。適用于糧食、食品、飼料原料、配合飼料等樣本中的AFT總量的檢測(cè)。

適用范圍

可定性、定量檢測(cè)谷物、花生、食用油、飼料、啤酒、紅酒、醬油、面粉等樣本中的AFT總量。

試驗(yàn)原理

  采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA，在微孔板上預(yù)包被AFT抗原，加入樣本（或AFT標(biāo)準(zhǔn)品溶液）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的AFT總量抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的AFT與預(yù)包被在板孔上的AFT抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的AFT抗體，與樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的AFT結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去，再加入顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物AFT抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得出相應(yīng)殘留物AFT的含量。

試劑配制

（1）將取出放置于室溫中，使試劑盒回溫至室溫 (20-25℃)。

（2）10倍稀釋洗滌液準(zhǔn)備：40mL濃縮洗滌液 (10×)，用蒸餾水或去離子水稀釋至 400mL。在2-8℃可保存三個(gè)月。用前混勻。

（3）10倍稀釋濃縮樣品稀釋液準(zhǔn)備：20mL濃縮樣品稀釋液 (10×)，用蒸餾水或去離子水稀釋至 200mL。在2-8℃ 可保存三個(gè)月。用前混勻。

操作步驟

（一）谷物（樣品稀釋10倍）

1、脂肪含量少的谷物樣品（如大米、玉米、小米等）稱取1g（精細(xì)粉碎），加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取400ul上清液，加600ul樣品稀釋液，充分混勻；

5、取50ul溶液用于檢測(cè)。

（二）花生（樣品稀釋10倍）

1、稱取1g樣品（精細(xì)粉碎），加入2ml石油醚，再加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取400ul下層清液，加600ul樣品稀釋液充分混勻

5、取50ul溶液用于檢測(cè)。

（三）食用油（樣品稀釋10倍）

1、稱取1g樣品，加入4ml石油醚，充分振蕩；

2、再加4ml 50%甲醇/水溶液，輕搖3min，靜置分層；

3、取400ul下層清液，加600ul樣品稀釋液充分混勻；

4、取50ul溶液用于檢測(cè)。

（四）飼料（樣品稀釋5倍）

1、稱取1g飼料樣品（精細(xì)粉碎），加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取上層清液2ml并加入2mlCHCL3，輕搖3 min，靜置分層；

5、取1ml下層液，60℃氮?dú)獯蹈桑?/span>

6、加入500ul 50%甲醇/水（1:1）溶液溶解，并加入750ul樣品稀釋液，充分混勻；

7、取50ul溶液用于檢測(cè)。

（五）面粉（樣品稀釋10倍）

1、稱取1g面粉樣品，加入4ml 50%甲醇/水溶液；

2、充分振蕩3min；

3、5000g離心，10min；

4、取上層清液500ul并加入1mlCHCL3，輕搖3 min，靜置分層；

5、取500ul下層液（CHCl3層），60℃氮?dú)獯蹈桑?/span>

6、加入250ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入375ul樣品稀釋液，充分混勻；

7、取50ul溶液用于檢測(cè)。

（六）葡萄酒（樣品稀釋5倍）

1、取1ml葡萄酒樣品，加入4mlCHCL3；

2、輕搖3 min，靜置分層；

3、取1ml下層液，60℃氮?dú)獯蹈桑?/span>

4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解，再加入750ul樣品稀釋液，充分混勻；

5、取50ul溶液用于檢測(cè)。

（七）啤酒（樣品稀釋10倍）

1、取1ml啤酒樣品（去除CO2），加入2.5ml甲醇，再加入1.5ml蒸餾水；

2、振蕩3min；

3、取出500ul振蕩后的溶液再加入750 ul樣品稀釋液，充分混勻；

4、取50ul溶液用于檢測(cè)。

（八）醬油、醋（樣品稀釋5倍）

1、稱取1g樣品，加入1ml蒸餾水和4mlCHCL3；

2、輕搖3min，靜置（若未分層，5000g離心10min）；

3、去1ml下層液，60℃氮?dú)獯蹈桑?/span>

4、加入500ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入750ul樣品稀釋液，充分混勻；

5、取50ul溶液用于檢測(cè)。

注意事項(xiàng)

1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、每加一種試劑前需將其搖勻。

4、反應(yīng)終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

6、儲(chǔ)存條件

保存于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的顯色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、試劑變質(zhì)的跡象

顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（OD450nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8、該*反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

試劑盒組成

1、96孔酶標(biāo)板×1塊

2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶：（1ml/瓶）

  0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb

3、酶標(biāo)物 1瓶 …………………………………… 6ml

4、底物液1瓶  ………………………………… 12ml

5、終止液1瓶  ……………………………………6ml

6、濃縮洗滌液（10×）1瓶………………………40ml

7、濃縮樣品稀釋液（10×）1瓶…………………20ml

8、操作說(shuō)明書一份                                            

注意：標(biāo)準(zhǔn)品含有低濃度AFT、終止液含2M HCl，需小心取用。勿在有效期外使用本試劑盒。

貯藏條件及保存期

貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。

保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。

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